Руководство к практическим занятиям по биохимии. Учебное пособие для студентов специальностей «Ветеринария» и «Ветеринарно-санитарная экспертиза»
Шрифт:
4. После достижения заданной температуры установите пробирки с исследуемыми растворами в ячейки термоблока (4) и оставьте их в течение необходимого срока инкубации.
5. После завершения работы выключите прибор нажатием тумблера «Сеть» и отключите прибор из сети.
Правила пользования автоматической пипеткой переменного объема
1. Объем дозирования отображается на цифровом дисплее на рукоятке пипетки (рис. 1).
2. Требуемый объем устанавливается вращением операционной кнопки, расположенной наверху пипетки (рис. 2). Чтобы увеличить объем дозирования, поверните операционную кнопку против часовой стрелки, чтобы уменьшить объем – по часовой стрелке.
3. Убедитесь, что цифры, показывающие объем дозирования, целиком видны в окне дисплея и установлены до щелчка.
4. Запрещается устанавливать объем, выходящий за границы диапазона дозирования пипетки. Прилагая чрезмерное усилие при выкручивании операционной кнопки за пределы диапазона дозирования, Вы можете сломать детали внутреннего механизма, что приведет к поломке пипетки.
ТЕХНИКА ПИПЕТИРОВАНИЯ
А – исходное положение
В – первая остановка
С – вторая остановка
1. Нажмите на операционную кнопку до первой остановки (В). 2. Погрузите наконечник в раствор примерно на глубину 1 см и плавно отпустите кнопку (А).
3. Извлеките наконечник, аккуратно снимая излишки раствора о край резервуара.
4. Выпустите взятый раствор, плавно нажимая на кнопку до первой остановки (В). После примерно секундной паузы нажмите операционную кнопку до второй остановки (С). После выполнения данной операции наконечник должен полнocтью опустошиться.
5. Отпустите кнопку в исходное положение, если необходимо, смените наконечник и продолжайте пипетирование.
Всегда нажимайте и отпускайте операционную кнопку плавно.
Упор на пипетке должен опираться на указательный палец. При работе ВСЕГДА удерживайте пипетку в строго вертикальном положении!
Раздел 1. Простые и сложные белки. Нуклеиновые кислоты. Ферменты, коферменты, витамины
1.1. Семинар «Химия белков, аминокислоты»
Белки – это высокомолекулярные соединения, молекулы которых построены из остатков аминокислот, составляют основу структурных элементов клеток и тканей, а также выполняют многообразные жизненно важные функции (транспортные, защитные, регуляторные, каталитические), обусловленные способностью за счет своей уникальной пространственной структуры распознавать другие молекулы и взаимодействовать с ними.
Аминокислоты в молекуле белка соединены между собой пептидными связями (-CO-NH-), образуя полипептидные цепи. Пептидная связь возникает между карбоксильной группой одной аминокислоты и аминогруппой другой аминокислоты, при этом отщепляется молекула воды.
Аминокислоты, кодируемые генетическим кодом и включающиеся в процессе трансляции в белки, называют протеиногенными. В основу современной классификации аминокислот положено химическое строение их радикалов. Каждая аминокислота имеет не только своё название (тривиальное и химическое), но и принятое трехбуквенное сокращение, а также латинский однобуквенный символ.
Следует отметить, что аминокислоты являются не только структурными элементами пептидов и белков, но и входят в состав других природных соединений (коферментов, конъюгированных желчных кислот, антибиотиков). Некоторые аминокислоты являются предшественниками биологически активных веществ (гормонов, биогенных аминов) или важнейшими метаболитами (глюконеогенез, биосинтез и деградация протеиногенных аминокислот, цикл мочевинообразования).
Аминокислоты традиционно делятся на заменимые и незаменимые в зависимости от возможности их синтеза в организме животного. Для большинства моногастричных (нежвачных) животных незаменимыми являются 8 аминокислот: валин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, треонин, триптофан и фенилаланин, для растущего организма детенышей к незаменимым относят также аргинин и гистидин. Жвачные животные получают незаменимые аминокислоты преимущественно за счет бактериального белка, синтезируемого в рубце.
В белках различают несколько уровней структурной организации: первичную, вторичную, третичную и четвертичную структуры. Первичная структура определяется числом и последовательностью аминокислотных остатков, соединённых между собой пептидными связями. Вторичная структура возникает за счёт образования водородных связей между группами >N-H и O=C< данной полипептидной цепи, что приводит к упорядоченному расположению отдельных участков полипептидной цепи в виде -спиральной или -складчатой структуры. Третичная структура белков образуется за счёт взаимодействия радикалов аминокислот (водородные связи, ионные связи, дисульфидные мостики, гидрофобные взаимодействия). Четвертичная структура некоторых белков образуется при взаимодействии отдельных полипептидных цепей, обладающих вторичной и третичной структурой.
Белки условно делят на простые (при гидролизе образуют смесь аминокислот) и сложные, или конъюгированные (состоят из белкового и небелкового компонентов). В качестве небелковой части (простетической группы) конъюгированных белков могут выступать нуклеиновые кислоты, углеводы, липиды, металлы, пигменты, а также фосфорная кислота и коферменты, что находит отражение в классификации данной группы биологических соединений:
• хромопротеины
• нуклеопротеины
• липопротеины
• фосфопротеины
• гликопротеины
• металлопротеины
Хромопротеины содержат окрашенную простетическую группу, например, красные белки – гемопротеины (гемоглобин, миоглобин, цитохромы, каталаза, пероксидаза), желтые белки – флавопротеины (ферменты класса оксидоредуктаз, содержащие производные рибофлавина).
Нуклеопротеины в качестве простетической группы содержат ДНК или РНК, что объясняет их участие в экспрессии генов и биосинтезе белка.