Женское здоровье. Большая медицинская энциклопедия
Шрифт:
Диагностика
На основании строения хламидий, особенностей жизненного цикла микроорганизма и его взаимодействия с клетками организма, вызывающего мало– или асимптомное течение инфекции, часто характеризующейся латентной формой заболевания с множеством клинических проявлений, можно сделать заключение о том, что в подавляющем большинстве случаев единственным достоверным критерием существования урогенитального хламидиоза являются результаты лабораторных исследований.
При лабораторной диагностике хламидийной инфекции следует учитывать несколько важных факторов:
1) наличие сочетанных патогенных возбудителей (гонорея, трихомонада и др.), условно-патогенных микроорганизмов: уреа– и микоплазм и факультативно-анаэробной микрофлоры;
2) различные места локализации возбудителя и в соответствии с этим особенности взятия материала и его доставки в лабораторию, а также кратность исследования;
3) наличие большого количества методологий, существующих с целью установления лабораторного диагноза и сопоставления его с клиническими проявлениями воспалительного инфекционного процесса;
4) качество используемых тест-систем и квалификации персонала, проводящего исследования.
Однако существует определенный разрыв между диагностическими методами, разрабатываемыми и используемыми в научных исследованиях, и методами, доступными лабораторным службам практического здравоохранения.
Необходимы анамнестические данные (уретрит, эпидидимит и другие урогенитальные заболевания полового партнера), длительное течение заболевания (бели, зуд и др.), бесплодие, перенесенные ранее инфекционные заболевания мочеполового тракта (особенно гонорейной этиологии), которые предрасполагают к развитию хламидиоза.
Но основной упор в диагностике урогенитального хламидиоза делается на лабораторные методы: культуральный метод, с помощью которого определяют наличие живых, размножающихся хламидий, цитологическое исследование мазков, окрашенных по Романовскому – Гимза или Май – Грюнвальду – Гимза, выявление антигенов хламидий с помощью иммунофлюоресцентной микроскопииили иммуноферментного методав его различных модификациях, анализ генетического материала хламидий с помощью молекулярно-биологических методов.
Одним из наиболее чувствительных и высокоспецифичных методов лабораторной диагностики хламидийной инфекции до настоящего времени является культуральное исследование, поскольку хламидии не размножаются на искусственных питательных средах, как большинство бактерий. Материал для исследования с целью проведения культуральной диагностики берут методом поверхностного соскоба (ложечкой Фолькмана) со слизистых оболочек мочеполовых органов (уретра, шейка матки влагалища и др.). Исследуемый материал помещают в транспортную среду и как можно быстрее доставляют в лабораторию, но не позднее 24 ч. До доставки в лабораторию пробы хранят при температуре 2–8 °C. При необходимости более длительного хранения пробы замораживают при –70 °C. Перед проведением данного исследования не следует употреблять антибиотики в течение месяца.
...
Работа с клеточными культурами трудоемка, требует специальных условий и доступна лишь небольшому числу лабораторий, преимущественно в научно-исследовательских учреждениях.
Этот метод применяется главным образом в качестве подтверждающего метода при получении положительного результата с помощью прямой иммунофлюоресценции или молекулярно-биологического метода.
При определении излеченности хламидиоза культуральный метод незаменим, так как все остальные методы могут давать искаженные результаты. А определение лекарственной чувствительности клинических изолятов хламидий возможно только культуральным методом, пока не разработан генный метод определения детерминант резистентности к антибиотикам.
Иммуноморфологические методыпо сравнению с культуральным методом более просты и доступны практически любой лаборатории. Суть этих методов состоит в выявлении антигенов хламидий непосредственно в микроскопическом препарате, приготовленном из патологического материала (соскобы слизистой оболочки пораженного органа и т. п.). Чувствительность этих методов при исследовании из цервикального канала у женщин – 65 %, из уретры у мужчин – 97—100 % при 100 % специфичности. Метод в руках опытного исследователя дает отличные результаты, но просмотр большого числа стекол в день (более 30) очень утомителен.
Для оценки иммуноморфологических методов большое значение имеет качество взятия материала. Шейку матки необходимо тщательно протереть ватным тампоном, при этом удалить слизистую пробку из экзоцервикса. Материал наносится на предметное стекло вращательным движением. В этом материале должны присутствовать клетки цилиндрического эпителия и отсутствовать эритроциты и лейкоциты. Если при просмотре с помощью люминесцентного микроскопа на оранжево-коричневом фоне клеток в поле зрения обнаруживается не менее пяти элементарных телец, результат считается положительным.
Методы иммуноферментного анализа(ИФА) основаны на определении растворимого антигена хламидий. Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Они выделяют три основных антигенных комплекса: видоспецифический, родоспецифический и серовароспецифический. Постановка реакции требует точного выполнения инструкции, которая прилагается производителем к каждой тест-системе. Несоблюдение инструкции может привести к искаженному результату ИФА. Сыворотку (плазму), доставленную в лабораторию для исследования, можно хранить 18–36 ч при 4 °C. При хламидийной инфекции очень важно выявлять видоспецифические иммуноглобулины класса G (IgG), М (IgМ) и класса А (IgА) к антигенам Chlamydia trachomatis в сыворотке (плазме) крови человека. В настоящее время иммуноферментные методы с дифференциацией иммуноглобулинов данных классов к антигенам хламидий являются наиболее распространенными. При определении остроты инфекционного процесса учитывают динамику образования в инфицированном организме иммуноглобулинов М, А и G. Важно помнить, что IgА в крови (плазме) появляется через 1–2 недели после начала заболевания, чуть опережая по времени IgG. Результат реакции учитывают после выполнения всех манипуляций по интенсивности окраски реагирующей среды, которая пропорциональна количеству антигена Chlamydia trachomatis, сорбированного на дне панели. Для определения точной интенсивности окраски пробы фотометрируют при длине волны 492 нм.
...
Чувствительность и специфичность иммуноферментных методов при выявлении хламидийных антигенов – 60–70 %.
Молекулярно-биологические методыоснованы на определении специфического участка ДНК/РНК в геноме возбудителя. Самыми распространенными методами молекулярно-биологической диагностики в настоящее время являются полимеразная цепная реакция (ПЦР), лигазная цепная реакция (ЛЦР) и ДНК-гибридизация и ее варианты. В нашей стране наибольшее распространение получила ПЦР. Но относительно высокая стоимость наборов реактивов и самой аппаратуры ограничивает применение молекулярно-биологических методов, хотя внедрение неинвазивных способов получения от пациентов материала для исследования, который они могут собрать сами (моча, вульво-вагинальные выделения), позволяют снизить материальные затраты на проведение исследований.